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                共聚焦顯微鏡的熒光團的重要特征

                來源:本站       閱讀量:16     時間:2022-06-21 13:37:33

                熒光團根據其吸收和熒光特性進行分類和描述,包括光譜分布、**吸收和發射波長以及發射光的熒光強度。用于表征吸收光譜的最有用的定量參數之一是摩爾消光系數(用希臘符號ε,請參見圖 2(a)),它是分子吸收光能力的直接量度。消光系數可用于將吸光度單位轉換為摩爾濃度單位,并通過在定義的光程長度內測量摩爾濃度的參考波長(通常是吸收物質的**特征)處的吸光度來確定。熒光染料或熒光團的量子產率表示熒光發射效率的定量測量,并表示為發射的光子數與吸收的光子數之比。換句話說,量子產率表示給定的激發熒光染料將產生發射(熒光)光子的概率。量子產率通常介于 0 和 1 之間,通常用作顯微鏡探針的熒光分子的量子產率從非常低(0.05 或更低)到幾乎為一。通常,在大多數成像應用中都需要高量子產率。給定熒光團的量子產率隨環境因素(例如金屬離子濃度、pH 和溶劑極性)而變化,有時甚至達到極大的極端。


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                在大多數情況下,光子吸收的摩爾消光系數是在特定波長下定量測量和表示的,而量子效率是對熒光團整個光譜帶上的總積分光子發射的評估(見圖 2(b)) . 與在寬視場熒光顯微鏡中使用最短范圍(10-20 納米)帶通干涉濾光片的傳統弧光放電燈不同,在掃描共聚焦顯微鏡中用于熒光團激發的激光系統將激發限制在特定的激光光譜線中,這些光譜線僅包含幾個納米。然而,這兩種技術的熒光發射光譜都由類似的帶通或長通濾光片控制,這些濾光片可以覆蓋幾十到幾百納米。低于飽和水平,熒光強度與摩爾消光系數和熒光團的量子產率的乘積成正比,這種關系可用于判斷發射的有效性作為激發波長的函數。這些參數顯示了通常用于共聚焦顯微鏡研究的流行熒光團的變化范圍約為 20 倍,量子產率范圍從 0.05 到 1.0,消光系數范圍從一萬到四分之一百萬(升/摩爾)。一般來說,熒光團的吸收光譜對環境條件的依賴程度遠低于熒光發射特性(光譜波長分布和量子產率)。一種關系,可用于判斷發射的有效性作為激發波長的函數。這些參數顯示了通常用于共聚焦顯微鏡研究的流行熒光團的變化范圍約為 20 倍,量子產率范圍從 0.05 到 1.0,消光系數范圍從一萬到四分之一百萬(升/摩爾)。一般來說,熒光團的吸收光譜對環境條件的依賴程度遠低于熒光發射特性(光譜波長分布和量子產率)。一種關系,可用于判斷發射的有效性作為激發波長的函數。這些參數顯示了通常用于共聚焦顯微鏡研究的流行熒光團的變化范圍約為 20 倍,量子產率范圍從 0.05 到 1.0,消光系數范圍從一萬到四分之一百萬(升/摩爾)。一般來說,熒光團的吸收光譜對環境條件的依賴程度遠低于熒光發射特性(光譜波長分布和量子產率)。這些參數顯示了通常用于共聚焦顯微鏡研究的流行熒光團的變化范圍約為 20 倍,量子產率范圍從 0.05 到 1.0,消光系數范圍從一萬到四分之一百萬(升/摩爾)。一般來說,熒光團的吸收光譜對環境條件的依賴程度遠低于熒光發射特性(光譜波長分布和量子產率)。這些參數顯示了通常用于共聚焦顯微鏡研究的流行熒光團的變化范圍約為 20 倍,量子產率范圍從 0.05 到 1.0,消光系數范圍從一萬到四分之一百萬(升/摩爾)。一般來說,熒光團的吸收光譜對環境條件的依賴程度遠低于熒光發射特性(光譜波長分布和量子產率)。

                為共焦應用選擇的熒光團必須具有足夠的亮度水平和信號持久性,以使儀器能夠獲得不受過度光漂白偽影和低信噪比影響的圖像數據。在寬場熒光顯微鏡中,激發照明水平很容易用中性密度濾光片控制,并且可以降低強度(加上更長的發射信號收集周期)以避免飽和并減少不可逆的熒光損失。然而,共聚焦顯微鏡中的激發條件要嚴格幾個數量級,并且熒光團的特性和顯微鏡光學系統的效率所施加的限制成為確定激發速率和發射收集策略的主要因素。


                轉載于:https://www.olympus-lifescience.com/ja/microscope-resource/primer/techniques/confocal/fluorophoresintro/

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